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掌握elisa试剂盒试验技巧很重要
点击次数:395 发布时间:2018-11-13
  掌握elisa试剂盒试验技巧很重要
  elisa试剂盒实验经验是需要操作者们自身积累的,但是掌握了实验技巧之后可对实验的学习与操作事半功倍。E1ISA技巧学习很重要!下面一起来看看小编今天给大家带来了哪些实验技巧内容:
  抗原抗体反应要求在最适比例条件下进行,E1ISA反应试剂多,其工作浓度不同对结果影响较大,因此必须对包被抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)进行zui佳工作浓度的滴定和选择,以达到zui佳的测定条件。
  (一)方阵(棋盘)滴定法选择包被抗原的工作浓度:
  用包被液将抗原作一系列稀释(1:50~1:800)后,按行进行包被、洗涤。按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照),保温,洗涤。加工作浓度酶标抗体,洗涤,加底物显色,加酸终止反应后读取A值。选择强阳性参考血清A值;为0.8左右,阴性参考血清A值<0.1的包被抗原稀释度为工作浓度。
  (二)方阵(棋盘)法选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度:
  将抗体用包被液稀释为10mg/1、1mg/1、0.1mg/1三个浓度按行包被,每一个浓度包被三行(每行3孔),elisa试剂盒分别在每个浓度包被的、二、三行中分别加入强阳性抗原,弱阳性抗原和阴性对照,将酶标抗抗体用稀释液稀释为1:1 000、1:5000、1:10000三个浓度,分别加入每个浓度包被的、二、三列中。加底物显色,加酸终止反应,分别读取A值。以强阳性抗原液A值在0.8左右,阴性参考A值<0.1的条件为最适条件。据此选择包被抗体和酶标抗体的zui佳工作浓度。
  抗体的稀释度包括特异性抗体,中间抗体及标记抗体。任何一种免疫组化方法要想得到令人满意的染色效果,必须将抗体进行zui佳稀释。一般来说,抗体的稀释度取决于下列因素。
  1.抗体的浓度(亦称滴度)
  每毫升溶液内所含抗体分子越多,滴度就越高,该抗体可高度稀释,尤其是特异性一抗的稀释度。一般商品化抗体只知道每毫升含多少抗体蛋白量,不知道所含抗体分子。自己制备抗体可通过琼脂糖双扩散或放射免疫法进行测定。商品化抗体一般告知大约的稀释度,例如用PAP法可1:100~1:200稀释。但往往购买到一种新抗体后,需要利用组织切片进行zui佳稀释度的测定。
  2.抗体的配制
  抗体的配制及使用是开展免疫组织化学工作的一个重要环节,其检测的结果既要可靠,又要能重复,这就要求实验人员在配制抗体过程中要注意其度。目前,随着抗体稀释液的稳定性提高,一次稀释抗体可用一年。当然,还可以购买到商品化即用型一抗,使用非常方便。
  3.抗体稀释液的种类
  可根据需要选择不同的抗体稀释液。如稀释当天用完的一抗,用0.05m01/1(pH7.6)TBS即可。如需长期保存,可用如下稀释液:取0.1g明胶(或绿色明胶)溶在100m10.05m01/1(pH7.6)TBS缓冲液中,边搅拌边加热至60℃,待完全溶解后,冷却至室温,加入1g牛血清白蛋白,最后加入200mg aN3,分装保存在一40℃中备用。另外,抗体原液应分装后一40℃保存,可保存5年以上。
  elisa试剂盒应保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。
 
联系人:周雯
座机:
86-021-55825868
400-788-3317
手机:
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